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Transformations-Effizienz-Rechner

Beurteile die Qualität und Kompetenz deiner kompetenten Bakterienzellen (z. B. E. coli DH5α), indem du die koloniebildenden Einheiten (KBE) pro Mikrogramm Plasmid-DNA berechnest.

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Klonierungs-Variablen

Gib die DNA-Menge, die Suspensions- und ausplattierten Volumina sowie die Koloniezahl an.

Plasmid-DNA-Konzentration (ng/µL)

Plasmid-DNA-Volumen (µL)

Gesamtes Suspensionsvolumen (µL)

Ausplattiertes Volumen (µL)

Anzahl der Kolonien auf der Platte (KBE)

Transformations-Effizienz

7.5e6 KBE/μg

* Entspricht 7.500.000 Kolonien pro μg DNA.

Verwendete DNA-Gesamtmasse 0.0001 μg (0.1 ng)

Ausplattierungs-Anteil 0.20 (20.0%)

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Experten-Tipp

Hocheffiziente kommerziell kompetente Zellen erzielen Effizienzen von $> 1,0 \times 10^8$ KBE/µg. Laborerstellte Zellen liegen normalerweise im Bereich von $1,0 \times 10^6$ bis $1,0 \times 10^7$ KBE/µg.

Methodik & Berechnungen

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Effizienz-Gleichung

Die Transformationseffizienz stellt die pro Mikrogramm hinzugefügter DNA erzeugten Kolonien dar, bereinigt um die Verdünnungsfaktoren während des Ausplattierens:

KBE/µg = (Kolonien / DNA-Masse in µg) * (Suspensionsvolumen / ausplattiertes Volumen)

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Verbesserung der Transformationsrate

Um eine optimale Effizienz zu erreichen:

- Vermeide das Erwärmen kompetenter Zellen während der Handhabung; taue sie ausschließlich auf Eis auf. - Halte die Hitzeschockzeit strikt ein (typischerweise 42 °C für genau 30–45 Sekunden bei E. coli). - Lass die Zellen vor dem Ausplattieren 45–60 Minuten lang bei 37 °C in SOC- oder LB-Medium regenerieren.

Berechnung der Transformationseffizienz: Schritt-für-Schritt

Die Transformationseffizienz gibt an, wie viele koloniebildende Einheiten (KBE) pro Mikrogramm Plasmid-DNA entstehen:

Transformierte DNA-Masse bestimmen

Bestimme die Masse der eingesetzten DNA, z. B. 100 pg (0.0001 µg).

Anteil der ausplattierten DNA berechnen

Multipliziere die Gesamt-DNA mit dem Verhältnis von ausplattiertem Volumen zu Gesamtvolumen: DNA ausplattiert (µg) = Gesamt-DNA (µg) × (Ausplattiertes Vol / Gesamtvol).

Effizienz (KBE/µg) berechnen

Teile die Anzahl der Kolonien durch die ausplattierte DNA-Masse: Effizienz = Kolonien / DNA ausplattiert (µg).