PCR Mastermix-Rechner
Berechne die Reagenzienvolumina zur Vorbereitung von Mastermixes für mehrere Polymerase-Kettenreaktionen (PCR).
Ansatz-Parameter
Gib Anzahl der Reaktionen, Zielvolumen und Pipettierüberschuss an.
Reagenzien-Checkliste
| Komponente | Vol / Ansatz (μL) | Gesamt-Mix Vol (μL) |
|---|---|---|
| 10X PCR-Puffer | -- | |
| dNTP-Mix (10 mM) | -- | |
| Forward-Primer (10 μM) | -- | |
| Reverse-Primer (10 μM) | -- | |
| Taq DNA-Polymerase | -- | |
| Template-DNA | -- | |
| Wasser (Nuklease-frei) (Automatisch ausgeglichen) | -- | -- |
Gesamtvolumen des Mastermix
* Erstellt Ansatz für 11 Aliquots (inkl. Überschuss).
Pipettier-Reihenfolge
Legst du Wasser zuerst vor, gefolgt von Puffer, dNTPs und Primern. Gib die Taq-Polymerase zuletzt hinzu.
Standard 50 μL PCR-Rezeptur Referenztabelle
| Reagenz-Komponente | Stammlösungs-Konzentration | Endkonzentration im Ansatz | Volumen pro 50 μL Ansatz |
|---|---|---|---|
| PCR-Reaktionspuffer | 10X Stamm | 1X Endkonz. | 5,0 μL |
| dNTP-Mischung | je 10 mM | 0,2 mM (200 μM) | 1,0 μL |
| Forward- & Reverse-Primer | je 10 μM | 0,4 μM (400 nM) | je 2,0 μL |
| Taq DNA-Polymerase | 5 U/μL | 1,25 – 2,5 Einheiten | 0,25 – 0,5 μL |
| Template-DNA | Variabel | 1 – 100 ng genomisch / Plasmid | 1,0 – 5,0 μL |
| Nuklease-freies Wasser | N/A | Auffüllen auf 50 μL | 34,5 μL |
Berechnungsmethodik & Labor-Tipps
Mastermix-Formel
Berechnet Einzelkomponenten für Multi-Well-Platten inklusive Sicherheitsaufschlag.
Thermische Stabilität
Enzyme stets in Kühlblöcken (-20 °C) halten. Mastermix vor dem Verteilen sanft mischen und anzentrifugieren.
Häufig gestellte Fragen (FAQ)
Was ist ein PCR Mastermix? ▼
Ein PCR Mastermix ist ein vorgefertigtes Gemisch aus Puffer, dNTPs, Primern, Wasser und DNA-Polymerase. Er wird gleichmäßig auf Reaktionsgefäße verteilt, um Pipettierfehler zu vermeiden.
Warum sollte man Überschuss-Volumen (Sicherheitsreserve) einplanen? ▼
Ein Überschuss von 5 % bis 10 % (oder +1 Pipettierreaktion) gleicht Flüssigkeitsverluste an Pipettenspitzen aus.
Soll die Matrizen-DNA (Template) in den Mastermix gegeben werden? ▼
Nein, die Template-DNA sollte einzeln in die Reaktionsgefäße pipettiert werden, nachdem der Mastermix vorgelegt wurde.
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