PCR-Mastermix-Rechner
Berechne die benötigten Reagenzienvolumina für die Vorbereitung von Mastermixen für mehrere Polymerase-Kettenreaktionen (PCR). Gib die Reaktionsparameter ein und passe die Rezeptur an.
Reaktionsparameter
Gib die Anzahl der Reaktionen, das Zielvolumen und den Sicherheitsüberschuss an.
Reaktionskomponenten
| Komponente | Vol. pro Reaktion (µL) | Gesamtvolumen Mix (µL) |
|---|---|---|
| 10X PCR-Puffer | -- | |
| dNTP-Mix (10 mM) | -- | |
| Forward-Primer (10 µM) | -- | |
| Reverse-Primer (10 µM) | -- | |
| Taq-DNA-Polymerase | -- | |
| Template-DNA | -- | |
| Wasser (nukleasefrei) (Automatisch berechnet) | -- | -- |
Gesamtvolumen Mastermix
* Erstellt eine Rezeptur für insgesamt 11 Reaktionsaliquots (inkl. Überschuss).
Experten-Tipp
Bereite immer 5–10 % überschüssiges Volumen vor, um Pipettierverluste auszugleichen. Bereite den Mix auf Eis vor und füge die Polymerase als Letztes hinzu, um eine vorzeitige unspezifische Synthese zu verhindern.
Methodik & praktische Tipps
Mastermix-Berechnungen
Mastermixe vereinfachen die PCR-Vorbereitung und minimieren Abweichungen zwischen einzelnen Ansätzen. Das Gesamtvolumen jeder Komponente wird mit der Anzahl der Reaktionen multipliziert, zuzüglich des Sicherheitsüberschusses:
Best Practices für den PCR-Ansatz
- Templates separat halten: Bereite den Mastermix ohne die Template-DNA vor, fülle ihn in PCR-Tubes ab und gib die individuellen Templates erst am Ende hinzu, um Kreuzkontaminationen zu vermeiden.
- Mische den Ansatz vorsichtig (durch leichtes Klopfen oder Pipettieren) und zentriere die Tubes kurz an, um eine homogene Mischung zu gewährleisten, bevor du mit dem Thermocycling startest.
PCR-Mastermix-Berechnung: Schritt-für-Schritt
Das Mischen eines Mastermixes sichert die Gleichmäßigkeit der Reaktionen. So berechnen Sie die Volumina:
Komponenten pro Reaktion auflisten
Notiere die Volumina für Wasser, Puffer, dNTPs, Primer und DNA-Polymerase für einen einzelnen Ansatz.
Reaktionsanzahl und Pipettierpuffer eingeben
Erfasse die Anzahl der Wells und füge einen Puffer (z. B. 10 % oder +1 Ansatz) hinzu.
Gesamtvolumina berechnen
Multipliziere das Einzelvolumen jeder Komponente mit der korrigierten Reaktionsanzahl.
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