Annealing-Temperatur-Rechner (Ta)
Berechne die optimale Annealing-Temperatur für dein PCR-Protokoll zur Maximierung von Ausbeute und Spezifität.
Berechnungsparameter
Gib Schmelztemperaturen für Primer und Zielsequenz ein.
Erweiterte Pufferbedingungen
Berechnetes Ergebnis (Ta)
* Optimaler Annealing-Punkt für das Primerpaar.
Gradienten-Optimierung
Bei Nebenbanden erhöhe Ta um 1–2 °C. Bei zu schwacher Ausbeute reduziere Ta um 1–2 °C.
PCR-Polymerase Annealing-Richtwerte Referenztabelle
| Polymerase-Typ | Primerlänge | Empfohlene Ta-Abweichung von niedrigerer Tm | Standard-Elongationstemp. |
|---|---|---|---|
| Standard Taq DNA-Polymerase | 18 – 24 bp | 5 °C unter niedrigster Primer-Tm | 68 – 72 °C |
| High-Fidelity (Q5 / Phusion) | 20 – 30 bp | Gleich oder +3 °C über niedrigerer Tm | 72 °C |
| Hot-Start Taq | 18 – 25 bp | 3 – 5 °C unter niedrigster Primer-Tm | 72 °C |
Berechnungsmethodik & Formeln
Rychlik-Formel
Berücksichtigt das Gleichgewicht zwischen Primer-Stabilität und Amplicon-Schmelzdynamik.
Salz- & Kationen-Korrekturen
Einwertige Kationen (Na+, K+) und Mg2+-Ionen stabilisieren die Doppelhelix. Der Rechner führt log-lineare Ionenstärkekorrekturen durch.
Häufig gestellte Fragen (FAQ)
Was ist die PCR Annealing-Temperatur (Ta)? ▼
Die Annealing-Temperatur (Ta) ist die Temperatur während des PCR-Thermocyclings, bei der oligonucleotide Primer an die komplementäre DNA-Einzelstrangmatrize binden.
Was passiert bei zu hoher oder zu niedriger Annealing-Temperatur? ▼
Ist Ta zu hoch, binden die Primer unzureichend, was zu geringer Ausbeute führt. Ist Ta zu niedrig, entstehen unspezifische Fehlanlagerungen und Nebenprodukte.
Wie berechnet man Ta aus der Schmelztemperatur (Tm)? ▼
Regelmäßig liegt Ta etwa 3 °C bis 5 °C unter der niedrigsten Primer-Tm oder wird nach Rychlik berechnet: Ta = 0,3 * Tm(Primer) + 0,7 * Tm(Produkt) - 14,9.
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