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qPCR-Effizienzrechner

Bestimme die Effizienz deines qPCR-Assays. Gib die aus deiner Standardkurve erhaltene Steigung ein, um die prozentuale Effizienz und den Vervielfachungsfaktor pro Zyklus zu ermitteln.

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Steigung der Standardkurve

Gib die Steigung der linearen Regressionsgeraden von Ct vs. log(Konzentration) ein.

Steigung (Slope)

Typischer Bereich: -3,68 bis -3,10 (90 % bis 110 % Effizienz)

Amplifikationseffizienz

Effizienz (E) 100,0%

Amplifikationsfaktor 2,00

Leistung Exzellent (Ideal)

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Experten-Tipp

Eine Effizienz > 100 % (Steigung flacher als -3,32) deutet in der Regel auf Pipettierfehler oder Template-/Primer-Kontamination hin, während eine Effizienz < 90 % auf PCR-Inhibitoren oder schlechtes Primerdesign hinweist.

Methodik & Gleichungen

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Die Effizienzgleichung

Die Amplifikationseffizienz (E) und der Vervielfachungsfaktor werden wie folgt aus der Steigung der Standardkurve berechnet:

Amplifikationsfaktor = 10^-1/Steigung

E = (10^-1/Steigung - 1) * 100%

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Ideale Werte

- **Ideale Steigung:** -3,32 (100 % Effizienz, verdoppelt Templates in jedem Zyklus).
- **Akzeptabler Steigungsbereich:** -3,58 bis -3,10 (entsprechend 90 % bis 110 % Effizienz).
- **Bestimmtheitsmaß (R²):** Sollte ≥ 0,99 für eine verlässliche Standardkurve sein.

qPCR-Effizienz berechnen: Schritt-für-Schritt

Hier ist ein Rechenbeispiel unter Verwendung einer Standardkurvensteigung von -3,40:

Berechne den Exponenten

Teile -1 durch die Steigung.
Beispiel: -1 / -3,40 = 0,2941.

Berechne den Amplifikationsfaktor

Rechne 10 hoch den Exponenten.
Beispiel: 10^0,2941 = 1,968. Dies bedeutet, dass sich die Target-DNA in jedem Zyklus um das 1,968-Fache vervielfacht.

Berechne die prozentuale Effizienz

Ziehe 1 vom Faktor ab und multipliziere mit 100.
Beispiel: (1,968 - 1) × 100 = 96,8 %.